Diabetologia：激活但基本功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次造出现去甲自身特异性到再次造出现1型式哮喘临床研究病症的方面数万人在儿童时代就有极好的描述，多个去甲自身特异性外观上性的儿童当记事70%在肝细胞转换后10年内患上哮喘，而随访15年的儿童这一分之一增大到84%。比起之下，%临床研究1型式哮喘一半以上的型式1型式哮喘的发作的该系统还没有受益必要的研究成果。

更为多的人开始用作分阶段该系统来定义1型式哮喘的方面：群纤在再次造出现多种去甲自身特异性时离开第1收尾，再次造出现高血压异常时离开第2收尾，再次造出现病症时离开第3收尾。一些多发去甲自身特异性外观上性的群纤，在1期和2期，方面较极快，并发展为发作的1型式哮喘。我们之前描述了一分组在首次扫描到多种去甲自身特异性比对后至极多10年无哮喘的极极快方面者，这分组病征人数极多，但外观上非常明确。随后，我们断定去甲自身上皮细胞特异性CD8+T细胞氘自由基在方面缓极快的病征当中基本不普遍存在，但在近期发作和长期普遍存在的哮喘病征当中很容易扫描到。这似乎表明，与方面病征比起，这些病征自身免疫自由基的闭环加强。

中期研究成果表明，尽管闭环性T细胞氘(Treg)使用量正常，但哮喘病征普遍存在一些功能性缺陷，其当中仅限于对IL-2的自由基意志力提高。此外，哮喘病征当中的现象CD4+T细胞氘似乎对闭环更具抵抗性，纤现为现象T细胞氘的依赖性减弱，人为产生的Treg和纤外产生的正向Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞氘当中IL-2自由基减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+闭环性T细胞氘(Treg)在一小群极缓极快方面者当中的外观上，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的两端研究成果，在21岁以下复发的病征配偶当中检查1型式哮喘的脆弱考量。我们之前描述了长期缓极快方面者的外观上，他们保证多重去甲自身特异性外观上性大约10年，但没有再次造出现哮喘的临床研究病症，极快性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保证无哮喘并不想包括大量尿液比对的缓极快方面者纳入T和B细胞氘功能性该系统性。在目前的研究成果当中，8名极快方面者(SP分组)，当中位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的去甲自身特异性外观上性。所有的参加者都处于1型式哮喘方面的1期，尽管一些人随后无法操纵了去甲自身特异性对某些上皮细胞的外观上性自由基，然而，一名病征从未处于2期至极多6年，但没有再次造出现临床研究病症，一名病征被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采自实验比对时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据该系统性当中对该小分子透过了原则上审氘。分离造出来外周血单个氘细胞氘(PBMCs)，采用多参数流式细胞氘忍术和T细胞氘依赖性试验审氘小分子当中Treg的频数万人、遗传式和功能性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类比对、密切相关和回归)透过无全权负责聚类该系统性，审氘Treg遗传式。

结果：与健康小分子比起，来自极快方面纤的潜意识CD4+T细胞氘的全权负责聚类说明了，作用于的潜意识CD4+ Treg频数万人增大，与糖皮质激素正向的TNFR该系统性蛋白(GITR)暗示增大有关。一名HbA1c增高的病征与方面缓极快者和冗余的对照分组比起，Treg五音相同。功能性该系统性表明，与健康小分子比起，来自缓极快方面纤的Treg介导的CD4+现象T细胞氘依赖性明显损害。纤现为对现象CD4+T细胞氘CD25和CD134暗示的依赖性增大。

绘出1 深入的遗传式该系统性说明了，CD4+Treg亚型式在极快方面数据流当中增大。由FlowSOM作用于的Treg三楼，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞氘上。根据记号物暗示比对造出10个元簇:潜意识T细胞氘_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞氘;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞氘;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用作9个不同Treg记号作用于的10个元簇的MST。每个路由器代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器分组周围上色。每个路由器当中的年糕绘出坚称单个记号的暗示档次。(b)每个元聚类的热绘出，以说明了整纤记号暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)相对于总质量为每个metacluster木箱绘出表(总质量> 0.05%)确切为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞氘(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞氘(l)。蓝色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩扫描。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用作CITRUS的预测模型式证实，Treg频数万人的增大是方面缓极快的logo。分级门控(a - f)和柑橘该系统性(g-k)比起SP参加者和冗余的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞氘上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示透过分离造出来，模拟器FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及小分子SP 606(蓝色)当中CD25+ cd127的频数万人汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的木箱绘出表;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示高强度著色，斜线突造出的簇被识别为SP和HD数据流中间的不同。(j)木箱绘出表说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组当中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对于总质量(分之一)。(k)直方绘出说明了每个簇的遗传式(紫色)和Treg记号相对于暗示与故事情节暗示(深蓝色);上列，存储器Treg_3;示例一行，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇当中记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩扫描

绘出3 与健康献血者比起，方面缓极快者潜意识treg的GITR增大。每个潜意识CD4+T细胞氘元簇(潜意识T细胞氘_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞氘;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞氘;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个暗示记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的暗示热绘出(sp606不仅限于在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示联接，说明了直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon选取符号秩和扫描，p< 0.07(蓝色)所有小分子仅限于，p< 0.05(深蓝色)小分子SP 606和冗余的HD不仅限于在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(蓝色)联接，说明了直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩扫描

绘出4 来自缓极快方面的CD4+ treg细胞氘操纵现象CD4+T细胞氘的意志力提高。SP分组用深蓝色的终点站和左上角坚称，HD分组用金色的终点站和左上角坚称，蓝色的终点站/左上角坚称小分子sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘透过分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按检视的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠转化细胞氘，培训3翌日透过流式细胞氘忍术扫描。(a-d)与CD4+；也者相对于应该的treg培训(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性倍数。用作外观上性对照(作用于的组织起来该细胞氘不含treg)算出依赖性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差该系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

绘出5 现象CD4+T细胞氘对缓极快方面的T细胞氘转化的依赖性更尖锐。SP分组用深蓝色的终点站和左上角坚称，HD分组用金色的终点站和左上角坚称，蓝色的终点站/左上角坚称小分子sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘透过分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按检视的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠转化细胞氘，培训3翌日透过流式细胞氘忍术(CD25反染)和细胞氘因子该系统性。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性前年(b)。(c,d) CD25依赖性前年(c)和CD134依赖性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训当中的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差该系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

假设：我们得造出的假设是，来自缓极快方面子的转化潜意识CD4+Treg在GITR暗示当中受益了扩展和丰富多彩，突显了再进一步研究成果Treg在1型式哮喘后果群纤当中的异质性的必要性。

原文造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28