Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展加速的过程中逐渐扩展

从第一次用到呼吸道自身突变到用到1改型哮喘临床研究征状的令人满意赴援在婴幼儿时期就有更好的揭示，多个呼吸道自身突变白血病的婴幼儿中都有70%在呼吸道素切换后10年内患上哮喘，而随访15年的婴幼儿这一%增高到84%。来得之下，占总临床研究1改型哮喘一半以上的改型1改型哮喘的发病机制还没有人得到充分的研究课题。

越来越多的人开始理应用于再行系统对来定义1改型哮喘的令人满意：生物棒状在用到多种呼吸道自身突变时转入第1阶段性，用到低血糖异常时转入第2阶段性，用到征状时转入第3阶段性。一些多发呼吸道自身突变白血病的生物棒状，在1期和2期，令人满意较快，并转变为发病的1改型哮喘。我们早先揭示了一第三组在首次测定到多种呼吸道自身突变抽样后至少10年无哮喘的极快令人满意者，这第三组病患者000人少，但相似性颇为明确。随后，我们见到呼吸道自身上皮细胞特异性CD8+T蛋白质化学反理应在令人满意很快的病患者中都基本上不存在，但在近期发病和长期存在的哮喘病患者中都很容易测定到。这可能说明了，与令人满意病患者来得，这些病患者自身免疫化学反理应的抑制增强。

一时期研究课题说明了，尽管抑制性T蛋白质(Treg)数量正常，但哮喘病患者存在一些功能缺陷，其中都仅限于对IL-2的化学反理应灵活着性增大。此外，哮喘病患者中都的现象CD4+T蛋白质可能对抑制更具抵抗性，表现为现象T蛋白质的减缓减弱，纯净导致的Treg和棒状外导致的抑制Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T蛋白质中都IL-2化学反理应减弱。本研究课题的目的是揭示了CD4+抑制性T蛋白质(Treg)在一小群极很快令人满意者中都的相似性，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

新方法：BOX研究课题是一项以老年人结合的平行研究课题，在21岁以下确诊的病患者亲属中都安全检查1改型哮喘的致命因素。我们早先揭示了长期很快令人满意者的相似性，他们保持一致多重呼吸道自身突变白血病超过10年，但没有人用到哮喘的临床研究征状，快性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保持一致无哮喘并愿意提供大量血液抽样的很快令人满意者扩及T和B蛋白质功能分析。在目前的研究课题中都，8名快令人满意者(SP第三组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的呼吸道自身突变白血病。所有的参与者都所处1改型哮喘令人满意的1期，尽管一些人随后得不到了呼吸道自身突变对某些上皮细胞的白血病化学反理应，然而，一名病患者已经所处2期至少6年，但没有人用到临床研究征状，一名病患者被诊断为哮喘，该实验者72岁，在采集物理抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该NADP同步进行了原则上审计。剥离外周血单个核蛋白质(PBMCs)，有别于多值流式蛋白质练成和T蛋白质减缓试验审计NADP中都Treg的频赴援、表现改型和功能。理应用于FlowSOM和CITRUS(聚类核对、连续性和紧接著)同步进行无监督聚类分析，审计Treg表现改型。

结果：与保健NADP来得，来自快令人满意棒状的潜意识CD4+T蛋白质的监督聚类结果显示，抑制的潜意识CD4+ Treg频赴援增高，与糖皮质激素抑制的TNFR相关蛋白(GITR)隐含增高有关。一名HbA1c升高的病患者与令人满意很快者和也就是说的比对第三组来得，Treg谱有所不同。功能分析说明了，与保健NADP来得，来自很快令人满意棒状的Treg细胞内的CD4+现象T蛋白质减缓显着损坏。表现为对现象CD4+T蛋白质CD25和CD134隐含的减缓增高。

上图1 险恶的表现改型分析结果显示，CD4+Treg亚改型在快令人满意表头中都增高。由FlowSOM转化成的Treg室，围住在来自所有NADP的活着CD4+CD45RA -蛋白质上。根据上标物隐含核对出10个元簇:潜意识T蛋白质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白质;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)理应用于9个不同Treg上标转化成的10个元簇的MST。每个路由都是一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由第三组周围绘图。每个路由中都的饼上图指出单个上标的隐含级别。(b)每个元聚类的热上图，以结果显示整棒状上标隐含。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化成上图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对来说轻元素为每个metacluster装有终点站上图(轻元素> 0.05%)已确定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白质(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T蛋白质(l)。蓝色格子都是慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 理应用于CITRUS的预测模改型说明了，Treg频赴援的增高是令人满意很快的标志。这两项相关联(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的都是性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含同步进行剥离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(白斑)和SP(黑斑)第三组以及NADPSP 606(蓝色)中都CD25+ cd127的频赴援汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联叔父集的装有终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含风力着色，箭头突出的簇被标识为SP和HD表头彼此之间的不同。(j)装有终点站上图结果显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对来说轻元素(%)。(k)直方上图结果显示每个簇的表现改型(粉红色)和Treg上标相对来说隐含与时代背景隐含(红色);上列，寄存器Treg_3;下面偷偷地，寄存器Treg_4。时代背景与所有其他簇中都上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定

上图3 与保健献血者来得，令人满意很快者潜意识treg的GITR增高。每个潜意识CD4+T蛋白质元簇(潜意识T蛋白质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白质;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个隐含上标的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的隐含热上图(sp606不仅限于在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR隐含串联，结果显示直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴定，p< 0.07(蓝色)所有NADP仅限于，p< 0.05(红色)NADPSP 606和也就是说的HD不仅限于在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR隐含，从这两项相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)串联，结果显示直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴定

上图4 来自很快令人满意的CD4+ treg蛋白质操控现象CD4+T蛋白质的灵活着性增大。SP第三组用红色的终点站和格子指出，HD第三组用黑色的终点站和格子指出，蓝色的终点站/格子指出NADPsp606。理应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按辨别的%指示剂。用抗CD3 /28微珠活着化蛋白质，培训3翌日同步进行流式蛋白质练成测定。(a-d)与CD4+接收者者相对来说理应的treg培训(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培训。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE减缓百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百份。理应用于白血病比对(抑制的拥护蛋白质另有treg)算出减缓百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 现象CD4+T蛋白质对很快令人满意的T蛋白质活着化的减缓更寻常。SP第三组用红色的终点站和格子指出，HD第三组用黑色的终点站和格子指出，蓝色的终点站/格子指出NADPsp606。理应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按辨别的%指示剂。用抗CD3 /28微珠活着化蛋白质，培训3翌日同步进行流式蛋白质练成(CD25反染)和蛋白质因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培训。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE减缓%-(b)。(c,d) CD25减缓%-(c)和CD134减缓%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中都的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们给出的假设是，来自很快令人满意叔父的活着化潜意识CD4+Treg在GITR隐含中都得到了扩展和多样，强调了促使研究课题Treg在1改型哮喘风险生物棒状中都的异质性的实质。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28